Qizil qon hujayralari lizis buferi

Qizil qon hujayralari lizis buferi (ACK Lysis bufer) - bu qizil qon hujayralarini yadroli hujayralarga zarar bermasdan olib tashlash uchun mo'ljallangan klassik lizis eritmasi. Eritrosit lizatasi eritrotsitlar bo'lmagan to'qimalar hujayralarini parchalaydi va keyinchalik asosiy madaniyat, hujayra sintezi, oqim sitometrik tahlili, nuklein kislotalar va oqsillarni ajratish va ekstraktsiya qilish uchun ishlatilishi mumkin. Asosiy printsip - hujayra membranasining shishishiga olib keladigan hujayra ichidagi osmolyarlikdagi farqdan foydalanib, eritrotsitlarni lizing. Asosiy komponentlarga ammoniy xlorid, kaliy bikarbonat va EDTA-Na2 kiradi. Ammoniy ionlari hujayra membranasidan o'tolmaydi, boshqa ionlar esa hujayraning ichki va tashqi qismlari o'rtasidagi ion kontsentratsiyasining farqiga va tashqi suvning hujayra ichiga tarqalishiga olib keladi, bu qizil qon hujayralarining shishishi va erishiga olib keladi. lizis effekti. Mahsulot filtrlanadi va 0.2 mkm filtrli membrana orqali sterillanadi.

Ho'l muz bilan kema; 2-8 darajada saqlang, 12 oy davomida amal qiladi.

To'qimalar/hujayra namunalari:

1. Yangi to'qimalar tripsin yoki kollagenaz tomonidan hazm qilinadi va individual hujayra suspenziyasiga tarqaladi. 300-400 g da 5 daqiqa 4 darajada santrifüj qiling va supernatantni tashlang.

2. 1:3-5 nisbatda qizil qon hujayralari lizis buferini hujayra cho'kmasiga qo'shing, sekin puflang va 1-2 daqiqa davomida lizing qiling.

3. 4 daraja haroratda 800-1000 aylanish tezligida 5-8 daqiqa santrifüj qiling, so'ngra qizil suyuqlikni tashlang. Lizis to'liq bo'lmasa, 2 va 3-bosqichlarni takrorlang.

4. Hujayralar cho'ktiriladigan fraktsiyaga 3-5 ml Hank eritmasi yoki zardobsiz kultura muhitini qo'shish orqali qayta suspenziya qilindi va keyin 300-400 g haroratda 3-5 daqiqa 4 daraja santrifüj qilindi. Hujayralarni yuvish uchun bu qadam 2-3 marta takrorlandi.

5. Keyingi tajribalar uchun zarur bo'lgan tegishli eritma bilan qayta suspenziya qilingan hujayralar; RNK ekstraktsiyasi uchun 4-bosqichning boshida DEPC suvi bilan tayyorlangan eritmadan foydalanish afzalroqdir.

1. Yangi antikoagulyant qon, santrifüjdan keyin supernatantni tashlang.

2. Hujayra yog'inlarining hajmini oldindan hisoblang va 1:6-10 nisbatda hujayra yog'iniga 2-8 daraja oldindan sovutilgan qizil qon hujayralari lizis buferini qo'shing. Masalan, 0.2 ml hujayra choʻkmasi uchun 1.2-2.0 ml qizil qon tanachalari lizis buferini qoʻshing, aralashtirish uchun muloyimlik bilan puflang va {{11} uchun parchalanadi. } min 4 daraja yoki xona haroratida.

3. 4 daraja haroratda 800-1000 aylanish tezligida 5-8 daqiqa santrifüj qiling, so'ngra qizil suyuqlikni tashlang. Agar eritrotsitlar lizisi to'liq bo'lmasa, 2 va 3-bosqichlarni bir marta takrorlang;

4. Cho‘kma hosil bo‘lgan fraksiyaga Hank eritmasi yoki zardobsiz kultura muhitini qo‘shib hujayralar qayta suspenziya qilindi, so‘ngra 300-400 g haroratda 4 gradusda 3-5 daqiqa santrifüj qilindi. Bu qadam hujayralarni yuvish uchun 2-3 marta takrorlandi;

5. Keyingi tajribalar uchun zarur bo'lgan tegishli eritma bilan qayta suspenziya qilingan hujayralar; RNK ekstraktsiyasi uchun 4-bosqichning boshida DEPC suvi bilan tayyorlangan eritmadan foydalanish afzalroqdir.

1. Ushbu mahsulot filtrlangan va sterillangan. Kontaminatsiyani oldini olish uchun aseptik ishlashga e'tibor berish kerak.

2. Agar kuzatuv testi hujayra madaniyati uchun ishlatilsa, hujayralarning ifloslanishini oldini olish va hujayra madaniyatiga ta'sir qilmaslik uchun operatsiya o'ta toza skameykada bajarilishi kerak.

3. Santrifüj yuvishdan so'ng, agar juda oz miqdorda eritrotsitlar topilsa, keyingi aniqlashga ta'sir qilmasdan sinovni davom ettirish mumkin.

4. Xavfsizligingiz va sog'lig'ingiz uchun himoya ko'zoynagi, qo'lqop yoki himoya kiyimlarini taqing.

Faqat tadqiqot uchun foydalanish uchun!

Issiq teglar: qizil qon hujayralari lizis buferi, Xitoy qizil qon hujayralari lizis buferi ishlab chiqaruvchilari, etkazib beruvchilari, zavodi