Dil hujayra membranasi qizil floresan bo'yash to'plami

 

Mahsulot nomi	Mushuk. Yo'q	Spesifik.
Dil hujayra membranasi qizil floresan bo'yash to'plami	G1705	100-1000 T

 

 

Dil, shuningdek, DilC18(3), 1,1`-Dioktadesil-3,3,3`,3`-tetrametilindokarbosiyanin perklorat nomi bilan tanilgan, molekulyar og'irligi 933,87, lipofil, uzun zanjirli dialkildikkarbosiyaninlar sinfidir. bo'yoqlar, lyuminestsent bo'yoqlar, odatda hujayra membranalarini etiketlashda ishlatiladi va boshqa yog'da eriydigan biologik tuzilmalar. Hujayra membranasiga kirgandan so'ng, Dil lateral ravishda tarqalib, butun hujayra membranasini asta-sekin bo'yab qo'yishi mumkin. Dil floresansi hujayra membranasiga kirishdan oldin juda zaif bo'ladi va u hujayra bilan bog'langanda flüoresansning intensivligi sezilarli darajada kuchayadi va u to'q sariq rangni chiqarishi mumkin. qo'zg'alishdan keyin qizil floresans va standart TRITC filtrlari tomonidan aniqlanishi mumkin. Dilning maksimal qo'zg'alish to'lqin uzunligi 550 nm, maksimal emissiya to'lqin uzunligi esa 564 nm. Dilning xususiyatlariga ko'ra, u tirik hujayralarni, shuningdek, qo'zg'almas hujayralarni bo'yashga qodir. Bunga qo'chimcha. Dil problari odatda hujayralarning hayotiyligiga ta'sir qilmaydi, shuning uchun oldinga yoki teskari yorliqli hujayralar yoki ba'zi moddalar (eksozomalar) izlovchini aniqlash sifatida ishlatilishi mumkin.

Dil hujayra membranasi qizil floresan bo'yash to'plamida Dil floresan probi va optimallashtirilgan bo'yash buferi mavjud bo'lib, ular hujayra membranasini tezroq bo'yashni, floresansni yanada yorqinroq va barqaror qilish imkonini beradi.

 

 

Quruq muz bilan jo'natish; qorong'i joyda -20 darajada saqlang, 6 oy davomida amal qiladi.

 

 

Komponent raqami	Komponent	G1704
G1705-1	Dil hujayra membranasi qizil lyuminestsent probi	100μL
G1705-2	Bo'yash buferi	100 ml
Qo'llanma		Bitta nusxa

 

 

1. Dil bo'yash uchun ishchi eritmani tayyorlash:

1.1. Dil hujayra membranasi qizil lyuminestsent probini 1:250 nisbatda bo'yash buferi bilan aralashtirib, suyultirib, Dil bo'yash uchun ishchi eritmani (foydalanishga tayyor) tayyorlang; Esda tutingki, eng yaxshi bo'yash effektini olish uchun Dil probini suyultirish nisbati muayyan vaziyatga qarab 1:250-1:500 da sozlanishi mumkin.

 

2. Jonli suspenziya hujayralarini bo'yash

2.1. Toʻxtatilgan hujayralarni 500-1, 000×g da xona haroratida 3-5 daqiqa davomida santrifüj qiling, hujayra supernatantini olib tashlang;

2.2. Hujayralarni oxirgi hujayra zichligiga 1-2×106 hujayra/ml ga qayta suspenziya qilish uchun kerakli miqdorda Dil boʻyash uchun ishchi eritma qoʻshing.

2.3. 37 daraja qorong'i joyda 5-20 daqiqa davomida inkubatsiya qiling. Optimal inkubatsiya vaqti turli hujayralar uchun farq qiladi. 5 daqiqadan boshlang va oxirgi binoni natijasiga qarab inkubatsiya vaqtini optimallashtiring.

2.4. Inkubatsiya oxirida xona haroratida 500-1000 g da 3-5 daqiqa davomida santrifüj qiling va Dil bo'yash uchun ishchi eritmani aspiratsiya qiling;

2.5. Hujayralar 37 daraja oldindan qizdirilgan PBS yoki hujayra madaniyati muhiti bilan qayta suspenziya qilindi va supernatantni olib tashlash uchun 500-1000 g da 3-5 daqiqa davomida santrifüj qilindi;

2.6. 2.5-bosqichni takrorlang.

2.7. To'g'ridan-to'g'ri oqim sitometriyasi yoki hujayralarni ko'p quduqli plastinkaga, hujayra madaniyati idishiga yoki hujayra ko'tarilgan slaydga o'tkazgandan so'ng floresan mikroskopiya orqali aniqlanadi. Dil 550 nm da qo'zg'alish maksimal va 564 nm da maksimal emissiyaga ega.

 

3. Jonli yopishgan jonli hujayralarni bo'yash (6-quduq plastinkasiga misol tariqasida):

3.1. Muayyan zichlikdagi 6-quduq plastinkasiga yopishgan hujayralar urug'i.

3.2. Madaniyat muhitini olib tashlang va hujayralarni PBS bilan ikki marta yuving (G4202 tavsiya etiladi). 1 ml Dil bo'yash uchun ishchi eritma qo'shing (boshqa o'lchamdagi quduq plitalari, bo'yoq hujayralarni qoplashini ta'minlash uchun mos ravishda o'rnatiladi);

3.3. Qorong'ida 37 daraja haroratda 5-20 daqiqa davomida inkubatsiya qiling. Optimal inkubatsiya vaqti turli hujayralar uchun farq qiladi. 5 daqiqadan boshlang va oxirgi binoni natijasiga qarab inkubatsiya vaqtini optimallashtiring.

3.4. Hujayra membranasini bo'yash ishchi eritmasini aspiratsiya qiling va hujayralarni oldindan qizdirilgan PBS yoki hujayra muhiti bilan 1-2 marta yuving.

3.5. Oldindan isitiladigan hujayra madaniyati muhitini yoki hujayra muhitini 37 darajaga qo'shing va hujayralarni floresan mikroskop bilan aniqlang. Dil 550 nm da qo'zg'alish maksimal va 564 nm da maksimal emissiyaga ega.

 

4. Qattiq yopishgan hujayralarni bo'yash:

4.1. Namuna oldindan ishlov berish:

Hujayralar uchun: hujayra muhitini olib tashlang va PBS bilan 1-2 marta yuving. Xona haroratida 10 daqiqa davomida 4% paraformaldegid fiksator eritmasini qo'shing (G1101 tavsiya etiladi). Tuzatish eritmasini olib tashlang va PBS bilan 2-3 marta yuving;

4.2. O'tkazuvchanlik: 0.1-0.5% Triton-100 qo'shing (PBS bilan tayyorlangan) va xona haroratida 10 daqiqa davomida o'tkazing. O'tkazuvchanlik eritmasini olib tashlang va PBS bilan 2-3 marta yuving.

4.3. (Ixtiyoriy, immunofluoresan yorliqlash) Immunitet bo'yash protokoliga muvofiq antikorlar bilan inkubatsiya qiling yoki boshqa bo'yoqlar bilan inkubatsiya qiling.

Eslatma: Bloklovchi eritma, antikor suyultiruvchi va immuno-bo'yoq uchun yuvish eritmasi tarkibida yuvish vositalari bo'lmasligi kerak.

4.4. Hujayralarni qoplash uchun kerakli miqdorda Dil bo'yash uchun ishchi eritma qo'shing, yorug'likdan 37 daraja uzoqda 5-20 daqiqa davomida inkubatsiya qiling va Dil bo'yash uchun ishchi eritmani aspiratsiya qiling. Optimal bo'yash natijalarini olish uchun binoni vaqtini maxsus hujayra namunasiga moslashtirish tavsiya etiladi;

4.5. Hujayralar 2-3 marta PBS bilan yuvildi va keyin kuzatish uchun floresan mikroskop ostida joylashtirildi (hujayralar tegishli miqdorda PBS bilan qoplanishi kerak).Dil maksimal qo'zg'alish to'lqin uzunligi 550 nm va maksimal emissiya to'lqin uzunligi 564 nm. .

 

5. Ekzosomalarning lyuminestsent belgilari:

5.1. Tegishli miqdorda Dil bo'yash ishchi eritmasi bilan qayta suspenziyalangan ekzosoma yog'inlari.

5.2. Qorong'ida 30 daqiqa davomida 37 daraja haroratda inkubatsiya qiling.

5.3. (ixtiyoriy) Namunani 10-katlama hajmli PBS bilan suyultiring.

5.4. Ortiqcha bo'yoqlarni olib tashlash uchun oldingi ekstraksiya protokoliga muvofiq yana ekstraksiya qilingan ekzosomalar.

5.5. Dil-yorliqli ekzosomalarni olish uchun PBSda qayta to'plangan ekzosomalar yog'inlarini to'plang. U hujayralarni qabul qilish kabi keyingi tajribalar uchun ishlatilishi mumkin.

 

 

1. Barcha lyuminestsent bo'yoqlarda söndürme bilan bog'liq muammolar mavjud, iltimos, floresan o'chirishni sekinlashtirish uchun operatsiya vaqtida yorug'likdan himoya qiling.

2. Prob lipofil bo'lganligi sababli, glitserin yoki boshqa organik moddalarni o'z ichiga olgan reagentlardan foydalanmang.

3. Agar fiksatsiya zarur bo'lsa, biz 4% paraformaldegidda mahkamlashni tavsiya qilamiz. Boshqa noto'g'ri tuzatish echimlari yuqori floresan fonga olib keladi.

4. Probning optimal suyultirish nisbati va inkubatsiya vaqti hujayralar va eksperimental talablar orasidagi turli sezuvchanlik tufayli haqiqiy vaziyatga qarab sozlanishi kerak.

5. Xavfsizligingiz va sog'ligingiz uchun himoya ko'zoynak, qo'lqop yoki himoya kiyim kiying.

 

Faqat tadqiqot uchun foydalanish uchun!

 

 

Issiq teglar: Dil hujayra membranasi qizil floresan bo'yash to'plami, Xitoy dil hujayra membranasi qizil floresan bo'yash to'plami ishlab chiqaruvchilar, etkazib beruvchilar, zavod