SweTransRNK transfeksiya reaktivi

 

Mahsulot nomi	Mushuk. Yo'q.	Spesifik.
SweTransRNK transfeksiya reaktivi	G1806-0.5ML	0,5 ml

 

 

Ushbu mahsulot yuqori samarali katyonik polimer asosidagi RNK transfeksiya reaktivi bo'lib, u RNKni nukleazlar tomonidan parchalanmasdan to'g'ridan-to'g'ri maqsadli hujayralar sitoplazmasiga etkazib beradi. Genni ifodalash jarayoni sitoplazmada yadroga kirmasdan sodir bo'ladi va maqsadli hujayraning transkripsiya regulyatsiyasi bilan cheklanmaydi. Ushbu mahsulot sarumning ozgina ta'siri, juda past toksikligi, yaxshi barqarorligi, oson ishlashi va yaxshi takrorlanishining afzalliklariga ega. U turli yopishgan hujayralar va suspenziya hujayralarining RNK transfeksiyasiga qo'llanilishi mumkin.

 

 

Ho'l muz bilan kema; 12 oy davomida 2-8 darajada saqlang.

 

 

Komponent	G1806-0.5ML
SweTransRNK transfeksiya reaktivi	0,5 ml
Qo'llanma	1 dona

 

 

1. Birikuvchi hujayralarni transfeksiyadan oldin tayyorlash (6-quduq plitasi, masalan, boshqa spetsifikatsiyalar ilova qilingan jadvalga qarang):

a. Transfeksiyadan bir kun oldin hujayralar bir tekisda quduq plastinkasiga mos zichlikda ekiladi, shunda hujayralar rasmiy transfeksiya vaqtida 70-85% ga yaqinlashadi;

b. Transfeksiyadan oldin asl hujayra madaniyati muhitini olib tashlang, hujayralarni xona haroratidagi PBS buferi bilan 1-2 marta yuving va keyin 1,9 ml sarumsiz yoki past zardobli (5% dan kam) bazal muhit (turli xil) bilan almashtiring. hujayralar sarumga turlicha qaramlikka ega, iltimos, sarum foizini mos ravishda moslang);

c. Hujayralar suyuqlik almashinuvi va transfeksiya komplekslari tayyorlangandan so'ng hujayra madaniyati inkubatoriga joylashtiriladi;

2. Transfeksiya uchun suspenziya hujayralarini tayyorlash:

a. Transfeksiya kuni, muhitni olib tashlash uchun tegishli miqdordagi hujayralarni sentrifuga qilgandan so'ng, hujayralarni sarumsiz yoki past zardobli (5% yoki undan kam) bazal muhitda tegishli konsentratsiyaga qayta suspenziya qiling va 1,9 ml resuspenziyani bir xilda emlang. quduq plitasida;

b. To'xtatilgan hujayralar bilan emlangan quduq plastinkasini hujayra madaniyati inkubatoriga joylashtiring va transfeksiya kompleksini tayyorlashni boshlang (transfektsiya kompleksi va madaniy muhit o'rtasidagi hajm nisbati yopishgan hujayralar nisbatiga murojaat qilib, mos ravishda sozlanishi mumkin);

3. Transfeksiya kompleksini tayyorlash:

a. A eritmasini tayyorlang: 80 pmol RNK bo'lgan 50 mL sarumsiz bazal muhit, portlatiladi va aralashtiriladi;

b. B eritmasini tayyorlash: 4-20 mL SweTransRNA transfeksiya reagenti bilan zardobsiz 50 mkl bazal muhit, puflanadi va aralashtiriladi;

c. Suyuqlik A va suyuqlik B ni xona haroratida 5 daqiqaga qoldiring;

d. A eritmasiga B eritmasini qo'shing, yaxshilab aralashtirish uchun sekin puflang va RNK-transfeksiya reagent kompleksini hosil qilish uchun xona haroratida 15-20 daqiqa inkubatsiya qilishni davom ettiring;

4. Hujayralarning transfeksiyasi:

a. Oldingi bosqichda olingan RNK-transfektsion reagent kompleksi "1-bosqich" yoki "2-bosqich" da almashtirilgan suyuqlik bilan teshik plastinkasiga qo'shiladi;

b. Transfeksiya kompleksini o'z ichiga olgan muhitni quduq plastinkasidagi muhit bilan yaxshi aralashtirish uchun kultura plastinkasini muloyimlik bilan silkitgandan so'ng, quduq plitasi 5% CO2 inkubatorida 37 daraja inkubatsiya qilinadi;

c. 4-6 soat inkubatsiyadan keyin turli hujayralar mos keladigan yangi muhitga almashtiriladi va keyingi inkubatsiya uchun inkubatorga joylashtiriladi;

d. Transfeksiyadan 24-48 soat oʻtgach, hujayralar kuzatiladi yoki yigʻiladi.

 

 

1. Iltimos, yaxshi holatda sog'lom hujayralardan foydalaning va reanimatsiya qilingan hujayralarni transfeksiyadan oldin kamida ikki marta o'tkazish tavsiya etiladi.

2. Transfeksiya uchun yuqori sifatli RNK dan foydalaning.

3. Mahsulot birinchi marta ishlatiladi, qayta-qayta muzlatish va eritishning oldini olish uchun alohida qadoqlash tavsiya etiladi.

4. Hujayra tolerantligining asosi ostida RNK-transfeksiya reagent kompleksining inkubatsiya vaqti mos ravishda uzaytirilishi mumkin va transfeksiya ta'siri yaxshiroq bo'ladi. RNK ning transfeksiya reagentlariga nisbati mos ravishda sozlanishi mumkin.

5. Sog'ligingiz va xavfsizligingiz uchun, iltimos, ish paytida laboratoriya xalati va qo'lqop kiying.

 

Jadval: Turli madaniyat plitalari uchun zarur bo'lgan transfeksiya reagentlari va RNK miqdori

Madaniyat taomi	Yagona quduq maydoni	Emlangan hujayralar soni	RNK transfeksiyasi		Umumiy hajm
			Transfektsion reaktiv	RNK
96-quduq plitasi	0.3 sm²	(2.0-4.0)×104	0.25-1.25 μL	5 pmol	0.1 ml
24-quduq plitasi	2.0 sm²	(1.2-2.4)×105	1.0-5.0 μL	20 pmol	0,5 ml
12-quduq plitasi	4.0 sm²	(2.4-4.8)×105	2.0-10 μL	40 pmol	1.0 ml
6-quduq plitasi	9,5 sm²	(6.0-10)×105	4.0-20 μL	80 pmol	2.0 ml

 

Faqat tadqiqot uchun foydalanish uchun!

 

 

Issiq teglar: swetransrna transfektsiya reagenti, Xitoyning swetransrna transfektsiya reaktivi ishlab chiqaruvchilari, etkazib beruvchilari, zavodi