Bir bosqichli tez mikoplazmani aniqlash to'plami (izotermik kuchaytirish usuli)

To'plam izotermik kuchaytirish texnikasi va vizual rang o'zgarishi orqali hujayra madaniyati muhitida sakkiz turdagi mikoplazmani tezda aniqlay oladi. DNK ekstraktsiyasisiz, 1 mL hujayra madaniyati supernatant to'g'ridan-to'g'ri reaksiya eritmasiga qo'shildi va 30 daqiqa 65 darajada reaksiyaga kirishdi. Ijobiy namunaning rangi sariqdan qizil rangga o'zgardi va butun jarayon uchun PCR asbobi yoki elektroforez uchun ochiq qopqoq kerak emas, bu aerozoldan kelib chiqadigan o'zaro ifloslanishni samarali oldini oladi. An'anaviy PCR usuli bilan taqqoslaganda, ushbu mahsulot oddiy operatsiya, yuqori sezuvchanlik afzalliklariga ega va madaniyat muhitida turli xil PCR inhibitörlerine toqat qilishi mumkin, shuning uchun noto'g'ri salbiy hodisa yo'q va aniqlash natijalari qPCR bilan juda mos keladi.

Ho'l muz bilan jo'natiladi va -20 darajada saqlanadi; 12 oygacha amal qiladi.

a: Tarkibida xromogen moddalar mavjud.

Boshlashdan oldin (iltimos, diqqat bilan o'qing)

65 graduslik suv hammomini yoki metall isitish blokini oldindan o'rnating.

1. Sinov uchun namuna tayyorlash:

a. Yopishqoq hujayralar: Supernatantni to'g'ridan-to'g'ri so'rib oling. Namunalarni hujayra inokulyatsiyasi yoki suyuqlik o'zgarishi 3 kundan ortiq bo'lsa va qo'shilish darajasi taxminan 90% bo'lganda olish tavsiya etiladi. Bu vaqtda supernatantdagi mikoplazmaning miqdori yuqori bo'lib, uni osongina aniqlash mumkin.

b. Suspenziya xujayralari: Supernatant 1,{1}} rpm tezlikda 5 daqiqa davomida santrifüjlangandan so'ng olindi. Namunalarni hujayra inokulyatsiyasi yoki suyuqlik almashtirilgandan keyin 3 kundan ortiq vaqt davomida, hujayra madaniyati muhitida mikoplazma miqdori yuqori bo'lgan va osonlik bilan aniqlash mumkin bo'lganda olish tavsiya etiladi.

2. Reaktsiya tizimi

a: Mycored Bufer eritishdan keyin teskari holda ishlatiladi.

b: Namunalar soniga ko'ra, yuqoridagi reaksiya tizimi tayyorlangandan so'ng, uni reaksiya trubasiga quyib, 20 mkl kerosin moyi qo'shing va keyingi bosqichga o'ting.

3. Namunalar qo'shing

a. Salbiy nazorat: birinchi reaksiya trubasiga salbiy nazorat sifatida hech qanday namuna qo'shilmagan.

b. Ijobiy nazorat: 1 mL musbat nazorat oxirgi reaksiya trubasiga ijobiy nazorat sifatida qo'shildi.

c. Sinov uchun namuna: Reaksiya naychasining qolgan qismiga 1 mkL hujayra madaniyati supernatantini qo'shing.

a: Namuna qo'shish uchun pipetka uchlari boshini kerosin moyining suyuqlik darajasiga cho'zing.

4. Reaksiya holati

Reaksiya trubkasini 30 daqiqa davomida inkubatsiya qilish uchun oldindan qizdirilgan 65 daraja suv hammomiga yoki metall hammomga o'tkazing. Agar rangning rivojlanishi aniq bo'lmasa, reaktsiya vaqtini 40 daqiqaga uzaytirish mumkin.

Reaksiya tugagandan so'ng darhol reaksiya trubkasini chiqarib oling va agar reaktsiya eritmasi xona haroratiga qaytganidan keyin ham sarg'aygan bo'lsa, natija salbiy bo'ladi. Reaksiya eritmasi qizil rangga aylansa, natija ijobiy bo'ladi. Reaksiya trubkasi ochilmasligi kerak, aks holda u osongina aerozol bilan ifloslanishiga olib keladi.

1. Reaksiya tugagandan keyin reaksiya trubkasini ochmang.

2. Reaksiya eritmasini tayyorlash jarayonida filtr elementi bo'lgan pipetka uchlarini qo'llash va tashlangan pipetka uchlari va reaksiya trubkasini o'z-o'zidan yopilgan qopga solib, o'z vaqtida ishlov berish tavsiya etiladi.

3. Sinov dastgohi va pipetkani tez-tez artib turish uchun nuklein kislotani tozalash vositasidan (tavsiya etilgan G3020) foydalaning.

Faqat tadqiqot uchun foydalanish uchun!

Issiq teglar: Bir bosqichli tezkor mikoplazmani aniqlash to'plami (izotermik kuchaytirish usuli), Xitoyning bir bosqichli tezkor mikoplazmani aniqlash to'plami (izotermik kuchaytirish usuli) ishlab chiqaruvchilari, etkazib beruvchilari, zavodi