MagBind MethylGold DNK Bisulfit konversiya to'plami

 

Mahsulot nomi	Cat.No.	Spesifik.
MagBind MethylGold DNK Bisulfit konversiya to'plami	G3639-50T	50 T

 

 

Epigenetika - genlarning nukleotidlar ketma-ketligini o'zgartirmasdan, genlarning ekspressiyasi va tartibga solinishidagi irsiy o'zgarishlarni o'rganadigan genetika bo'limi. Ular orasida DNK metilatsiyasi eng qadimgi kashf etilgan va eng chuqur o'rganilgan epigenetik tartibga solish mexanizmlaridan biridir. Ko'pgina hayvonlar va o'simliklarda DNK metilatsiyasi metil donor sifatida S-Adenosylmetioninga asoslangan bo'lib, metiltransferaza katalizi ostida sitozin halqasining beshinchi uglerod holati metil guruhiga kovalent bog'lanadi.

DNK metilatsiyasi prokaryotlar va eukariotlarda tabiiy hodisadir. Prokaryotlarda DNK metilatsiyasi xost DNKsini cheklovchi endonukleazlar tomonidan hazm bo'lishidan himoya qiladi, bu esa ekzogen DNKni yo'q qilishi mumkin. Yuqori eukariotlarda DNK metilatsiyasi gen ekspressiyasini tartibga solishda muhim rol o'ynaydi.

Mahsulot metillangan DNKni davolash uchun bisulfitdan foydalanadi va metillanmagan sitozinni urasilga aylantiradi, metillangan sitozin esa o'zgarishsiz qoladi, butun jarayon 4 soat ichida yakunlanishi va konversiya samaradorligi 99% dan oshishi mumkin. Shu bilan birga, to'plam DNKni magnit boncuklarda oltingugurtdan tozalash va qayta tiklash usulini qo'llaydi, bu esa o'zgartirilgan DNKning tiklanish miqdorini samarali ravishda yaxshilashi mumkin va butun operatsiya oqimi juda oddiy. O'zgartirilgan DNK PCR amplifikatsiyasi va quyi oqim tahlili uchun ishlatilishi mumkin, jumladan endonukleaza hazm qilishni cheklash, ketma-ketlik, mikroarray va boshqalar.

 

 

Xona haroratida jo'natiladi va saqlanadi; 12 oy davomida amal qiladi.

 

 

Komponent raqami	Komponent	G3639-50T
G3639-1	KT konvertatsiya reaktivi	10 marta / naycha × 5
G3639-2	Bufer BM	1,5 ml
G3639-3	Bufer GB	10 ml
G3639-4	Bufer JB	3,6 ml (ishlatishdan oldin 8,4 ml suvsiz etanol qo'shiladi)
G3639-5	Bufer PW	24 ml (ishlatishdan oldin 56 ml suvsiz etanol qo'shiladi)
G3639-6	SweMag boncuklar	1 ml
G3639-7	Nukleazsiz suv	10 ml
Qo'llanma		Bitta nusxa

 

 

1. Ishlatishdan oldin KT konversiya reagentiga 280 mkL Bufer BM va 910 mkL nukleazsiz suv qo'shing, so'ng eritish uchun aylantiring va -20 darajada saqlang.

2. Iltimos, ishlatishdan oldin Buffer DB ga 8,4 ml suvsiz etanol qo'shing, Buffer PW ga 56 ml suvsiz spirt qo'shing, yaxshilab aralashtiring va foydalaning.

3. Magnit stendlar va izopropanol talab qilinadi, lekin bu to'plamda berilmaydi.

 

 

1. PCR trubasiga 20 mkl genomik DNK qo'shing (umumiy miqdori 500 ng-2000 ng, hajmi 20 mkL dan kam bo'lsa, u Nukleazsiz suv bilan to'ldirilishi mumkin). 130 mkl KT konversiya reagentini qo'shing va pipetka bilan muloyimlik bilan aralashtiring.

2. Birinchi bosqichning aralashmasini PCR asbobiga o'tkazing va uni 10 daqiqa davomida 98 daraja va 2,5 soat davomida 64 darajaga qo'ying. Ishlagandan so'ng, mahsulot 4 daraja haroratda saqlanadi.

3. Yuqoridagi mahsulotlarga 150 mkL Buffer GB va 130 mL izopropanol qo‘shing, yaxshilab aralashtirish uchun pipetkadan foydalaning, so‘ng 15 mkL SweMag boncuklarini qo‘shing (ishlatishdan oldin bir tekis tarqalish uchun Vortex) va boncuklar bir tekis tarqalguncha puflash uchun pipetkadan foydalaning. .

4. Xona haroratida 10 daqiqa turing. Ushbu davrda magnit boncuklar bir xilda tarqalishi uchun pipetka bilan 3-4 marta teng ravishda aralashtiriladi.

5. Santrifüj trubkasini magnit stendga olib boring va 30 s ga qoldiring, shunda magnit boncuklari trubaning devoriga adsorbsiyalanadi. Aniq bo'lganda, supernatantni tashlang (ekstraktsiya samaradorligiga ta'sir qilmaslik uchun magnit boncuklarni so'rib olmang).

6. Santrifüj trubkasini magnit stenddan chiqarib oling, 400 mkL Buffer PW qo'shing, magnit boncuklar bir tekis tarqalguncha pipetka bilan puflang. Keyin sentrifuga trubkasini magnit stendga o'tkazing va 30 s ushlab turing, shunda magnit boncuklar nay devoriga adsorbsiyalanadi. Aniq bo'lganda, supernatantni tashlang (ekstraktsiya samaradorligiga ta'sir qilmaslik uchun magnit boncuklarni so'rib olmang).

7. Santrifüj trubkasini magnit stenddan olib tashlang, 200 mL Buffer DB qo'shing, magnit boncuklar bir tekis tarqalguncha uni pipetka bilan puflang, xona haroratida 15 daqiqa turing, davr davomida har 3 ~ 5 daqiqada aralashtiring (Buffer DB). genomik DNKning haddan tashqari parchalanishiga yo'l qo'ymaslik uchun qayta ishlash muddati juda uzoq bo'lmasligi kerak). Santrifüj trubkasini magnit stendga o'tkazing va 30 soniya davomida turing, shunda magnit boncuklar trubaning devoriga adsorbsiyalanadi va u shaffof bo'lgandan so'ng, supernatantni tashlang (ekstraktsiya samaradorligiga ta'sir qilmaslik uchun, so'rmang. magnit boncuklar chiqariladi).

8. Santrifüj trubkasini magnit stenddan chiqarib oling, 400 mkL Buffer PW qo'shing, magnit boncuklar bir tekis tarqalguncha uni pipetka bilan puflang. Keyin sentrifuga trubkasini magnit stendga o'tkazing va 30 s ushlab turing, shunda magnit boncuklar nay devoriga adsorbsiyalanadi. Aniq bo'lganda, supernatantni tashlang (ekstraktsiya samaradorligiga ta'sir qilmaslik uchun magnit boncuklarni so'rib olmang).

9. 8-bosqichni takrorlang.

10. Santrifüj trubkasi qopqog'ini oching, etanol to'liq bug'lanishi uchun uni xona haroratida 5 ~ 10 daqiqa yoki 65 daraja haroratda 3 ~ 5 daqiqaga qoldiring (magnit boncuklar hosilga ta'sir qilmaslik uchun juda quruq bo'lmang. nuklein kislotasi).

11. Santrifuga trubkasini magnit stenddan olib tashlang, sentrifuga trubasiga 30~50 mkL Nukleazsiz suv qo'shing, magnit boncuklar pipetka bilan bir tekis tarqalguncha puflang, xona haroratida 5 daqiqa turing.

12. Santrifüj trubkani magnit stendga magnit boncuklar to'liq adsorbsiyalanmaguncha olib boring va konvertatsiya qilingan DNK eritmasini olish uchun supernatantni yangi sentrifuga trubasiga singdiring.

 

 

1. Ishlatishdan oldin mahsulot qo'llanmasini diqqat bilan o'qing.

2. Magnit boncuklar osongina cho'kadi va ishlatishdan oldin yaxshilab silkitilishi yoki vortekslanishi kerak.

3. Buffer DB ni qayta ishlash muddati juda uzoq bo'lmasligi kerak, DNKning haddan tashqari parchalanishiga olib kelishi va keyingi tajribalarga ta'sir qilishi oson.

4. Elutsiyadan oldin etanol qoldiq etanolning quyi oqimdagi tajribalarga ta'sirini oldini olish uchun butunlay uchuvchan bo'lishi kerak.

5. Iltimos, magnit boncuklarni uzoq vaqt quritmang, chunki bu qaytarilmas boncuklar yig'ilishiga olib kelishi mumkin.

6. Qayta tiklangan DNK qayta muzlash va eritishning oldini olish uchun -20 darajada saqlanishi kerak.

7. Xavfsizligingiz va sog'ligingiz uchun, iltimos, laboratoriya xalati va bir martalik qo'lqop kiying.

 

Faqat tadqiqot uchun foydalanish uchun!

 

 

Issiq teglar: magbind metilgold dna bisulfit konversiya to'plami, Xitoy magbind metilgold dna bisulfit konversiya to'plami ishlab chiqaruvchilari, etkazib beruvchilari, zavodi