IF750-Tiramid

Tiramid signalini kuchaytirish (TSA) - bu maqsadli antijenlarning yuqori zichlikdagi in-situ belgilarini bajarish uchun HRP dan foydalanadigan va IF/IHC signalini kuchaytirish uchun qo'llanilishi mumkin bo'lgan fermentativ aniqlash usulining bir turi. TSA texnologiyasining asosiy tamoyillari: vodorod peroksid H2O2 mavjudligida, horseradish peroksidaza HRP tiraminni juda faol qisqa muddatli oraliq mahsulot sifatida katalizlashi mumkin. Qisqa vaqt ichida oraliq tiramin kompleksini hosil qilish uchun atrofdagi oqsillarning elektronga boy yuzasiga kovalent bog'lanishi mumkin va "orol" kabi ko'plab boy klasterlar markaz sifatida ferment bilan birlashadi. Signalning kuchayishiga erishish uchun antigen-antikorlarni bog'lash joyiga katta miqdorda lusiferin to'plangan.

TSA texnikasi an'anaviy usullar bilan aniqlanmaydigan kam miqdordagi maqsadlarni aniqlash uchun ishlatilishi mumkin. Tiraminga asoslangan signalni kuchaytirish texnologiyasi juda yuqori sezuvchanlikni ta'minlashi va juda oz miqdordagi maqsadli antijenlarni aniqlashi mumkin. TSA texnologiyasi antikorlar miqdorini sezilarli darajada kamaytiradi va antikorlarni tejaydi va ko'p rangli tasvirlash uchun an'anaviy bo'yash usullari bilan birgalikda ishlatilishi mumkin yoki namunadagi turli maqsadlarni belgilash uchun ikki yoki undan ortiq tiramin reaktsiyalari ketma-ket bajarilishi mumkin, shuning uchun bir nechta floresan bo'yash turli lyuminestsent tiraminlarni qayta-qayta etiketlash bilan erishish mumkin

Saqlash va foydalanish shartlari

Tashish uchun nam muz paketlari, 12 oy davomida -20 darajada saqlang.

Eslatma:

1. Xona haroratida eritilgandan so'ng, kolba ishlatishdan oldin qisqa vaqt davomida santrifüj qilinadi.

2. Floresan ikkilamchi antikor bilan solishtirganda, TSA to'plami yuqori sezuvchanlik va kuchliroq signalga ega. Shuning uchun birlamchi antikor kontsentratsiyasi kamaytirilishi kerak, odatda antikor qo'llanmasida tavsiya etilgan suyultirish nisbati asosida 5-10 marta o'ziga xos bo'lmagan bog'lanish natijasida fon floresansini kamaytirish kerak. Eng yaxshi natijalarga erishish uchun qarshilik gradienti kontsentratsiyasini o'rnatish tavsiya etiladi.

3. Agar fon floresansi kuchli bo'lsa, to'qimalarning avtofluoresansining söndürme bosqichini oshirish tavsiya etiladi.

4. Flüoresan Tiramidning tavsiya etilgan suyultirish nisbati 1:500 va suyultirish nisbati tajriba natijalariga ko'ra sozlanishi mumkin (tavsiya etilgan suyultirish nisbati diapazoni 1:200-1:1000).

5. Suyultirgichni o'zingiz tayyorlashingiz kerak, tarkibida 0,003% H2O2 bo'lgan 1×TBST (G0004 tavsiya etiladi). 1×TBST (G0004 tavsiya etiladi) 100 ml, 100 mL 3% H2O2 qo‘shing, yaxshilab aralashtiring. Suyultirgichning ishdan chiqishi oson, shuning uchun uni hozir ishlatish tavsiya etiladi.

6. Agar bir nechta floresan yorliqlash amalga oshirilsa, avval poliklonal antikorlarni, keyin esa monoklonal antikorlarni inkubatsiya qilish tavsiya etiladi. Avval yuqori ko'p maqsadli oqsilga mos keladigan antikor inkubatsiya qilinadi, so'ngra kam miqdordagi maqsadli oqsilga mos keladigan antikor inkubatsiya qilinadi. Muayyan operatsiya bosqichlari uchun TSAPLus lyuminestsent ko'p yorliqli (1-7 teg, 2-8 rangli floresan) bo'yash to'plamiga (G1226, G1236, G1255, G1256, G1257, G1259) murojaat qiling.

7. Ish paytida laboratoriya xalati va bir martalik qo'lqop kiying.

8. Floresan ko'rish tizimining yorug'lik manbai xaritasiga ko'ra, TSA floresan ko'p yorlig'ini amalga oshirish uchun turli floresan bo'yoq birikmalarini tanlash mumkin.

Faqat tadqiqot uchun foydalanish uchun!