Coomassie Brilliant Blue G250

Coomassie Brilliant Blue G250 oqsillarni tezda bog'lashi mumkin. Coomassie Brilliant Blue G250 ning maksimal singishi erkin holatda 488 nm ni tashkil qiladi. Protein bilan bog'langandan so'ng, maksimal so'rilish 595 nm ga o'zgardi. Optik yutilish qiymati oqsil tarkibiga mutanosibdir, shuning uchun u oqsilni miqdoriy aniqlash uchun ishlatilishi mumkin. Ushbu mahsulot G2001 Bradford Assay oqsil miqdorini aniqlash to'plamiga qo'shimcha sifatida ham foydalanish mumkin.

Xona haroratida jo'natish va saqlash, 12 oy davomida amal qiladi.

1. (Ixtiyoriy) Standart egri chiziqni chizish (mikroplatin oʻquvchi usuli): 0,5 mg/ml protein standart ishchi eritmasini tayyorlash uchun BSA ni suvda eritib yuboring. Proteinning standart ishchi eritmasi 96-quduq plastinkasiga 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20 mL darajalarda qo‘shiladi, so‘ngra ishlovchi gradient eritma PBS yoki fiziologik eritma bilan 20 mkl qo'shiladi. Protein kontsentratsiyasining gradient egri chiziqlari 0, 25, 50, 100, 200, 300, 400 va 500 ug/ml ni tashkil qiladi. Agar faqat nisbiy miqdoriy taqqoslashlar amalga oshirilsa, standart egri chiziqlar talab qilinmaydi.

2. Sinov uchun namunani tayyorlang: Sinov qilinadigan protein namunasi mos ravishda suyultiriladi (namunaning oqsil kontsentratsiyasi sinov natijasining ishonchliligini ta'minlash uchun standart egri diapazonda bo'lishini oldindan tajriba orqali aniqlash mumkin. ) va har bir namunadan 20 mL 96-quduq plastinkasiga qo'shiladi. Tekshiriladigan namunani oqsil standarti bilan bir xil eritmada suyultirish kerak.

3. Aniqlash: Har bir quduqqa 200 mkL Coomassie yorqin ko‘k G250 eritmasi qo‘shiladi va yaxshilab aralashtiriladi (96-quduq plitasi osilatorga 30 soniya davomida joylashtirilishi mumkin). Xona haroratida 3-5 daqiqadan so'ng, standart egri No 0 mos yozuvlar sifatida ishlatiladi va kolorimetrik o'lchov 595 nm to'lqin uzunligida amalga oshiriladi va har bir quduqning absorbsiya qiymati qayd etiladi.

4. Hisoblash: standart egri chiziqdagi gradient oqsil miqdori (ug/ml) abscissa sifatida, yorug‘likni yutish qiymati esa standart egri chiziqni chizish uchun ordinata sifatida olinadi. Namunaning absorbsiya qiymatiga ko'ra, mos keladigan quduqda o'lchanadigan namunadagi oqsil kontsentratsiyasi standart egri chiziqda (ug / ml) topilishi mumkin, so'ngra namunaning suyultirilishiga, haqiqiy protein konsentratsiyasiga ko'paytiriladi. o'lchanadigan namuna.

5. Bundan tashqari: aniqlash uchun spektrofotometr ishlatilsa, standart egri chiziqlar hosil qilish uchun reaksiya idishi sifatida shisha probirka yoki shisha kolorimetrik naychadan foydalaniladi. Tekshiriladigan oqsil namunasini to'g'ri suyultirilgandan so'ng, uni yangi shisha probirkaga yoki namunasi 1 ml bo'lgan kolorimetrik naychaga qo'shing. Standart egri chiziqli gradient trubkasi va namuna trubasiga 3 ml Coomassie yorqin ko‘k G250 eritmasini qo‘shing, yaxshilab aralashtiring, xona haroratida 3-5 daqiqa turing, so‘ngra kolorimetrik aniqlash uchun spektrofotometrdan foydalaning.

6. Aniqlash: Spektrofotometrning to'lqin uzunligi 595 nm ga o'rnatiladi va standart egri chiziq va sinovdan o'tadigan namuna standart egri chiziq No. 0 trubkasi mos yozuvlar sifatida nolga tenglashtiriladi. Standart egri chiziqlar 4-bosqichda tavsiflanganidek chiziladi va sinovdan o'tadigan namunalardagi oqsil kontsentratsiyasi hisoblab chiqiladi.

1. Ishlatishdan oldin mahsulotni xona haroratiga qaytarish kerak va aniqlanish sezgirligiga ta'sir qilmaslik uchun teskari aralashtirish kerak.

2. Xavfsizligingiz va sog'lig'ingiz uchun himoya ko'zoynagi, qo'lqop yoki himoya kiyimlarini taqing.

Faqat tadqiqot uchun foydalanish uchun!

Issiq teglar: coomassie brilliant blue g250, Xitoy coomassie brilliant blue g250 ishlab chiqaruvchilari, etkazib beruvchilari, zavodi