Mikoplazmani aniqlash to'plami (PCR)

Mikoplazmaning ifloslanishi hujayralarning barcha jihatlariga salbiy ta'sir ko'rsatadi va hujayra madaniyatida juda qadrli muammoga aylandi. Shuning uchun mikoplazmaning ifloslanishini muntazam ravishda aniqlash juda zarur. Ushbu mikoplazmani aniqlash to'plami turli ekilgan hujayra biologik materiallarida (masalan, hujayra madaniyati, eksperimental hayvonlarning sekretsiyasi, hayvonlar zardobi va boshqalar) mikoplazma ifloslanishini aniq aniqlash uchun PCR usulidan foydalanadi. To'plamda ishlatiladigan aralash primerlar Mycoplasmaning 16S rRNK ketma-ketligining saqlanib qolgan hududi uchun mo'ljallangan maxsus primerlardir. Mycoplasma DNK ning maxsus PCR kuchaytirilishi PCR shablon sifatida hujayra madaniyati eritmasidan foydalangan holda mos keladigan Mycoplasma PCR Mix (2×) bilan bir soat ichida yakunlanishi mumkin. Ushbu to'plam yuqori sezuvchanlikka ega va 20 tagacha mikoplazma nusxasini aniqlay oladi.

Ho'l muz bilan kema; -20 darajada saqlanadi, 12 oy davomida amal qiladi.

1. Namuna tayyorlang: tekshiriladigan hujayra madaniyati supernatantining tegishli miqdori toza PCR trubasiga olindi. Ushbu PCR naychalari PCR asbobida 5 daqiqa davomida 95 daraja issiqlik bilan ishlov berildi va undan shablon sifatida foydalanildi. Sarum namunalari Mycoplasma Free Water bilan suyultirilishi mumkin edi va tegishli namunalar toza PCR trubasiga joylashtirildi. Ushbu PCR naychalari PCR asbobida 5 daqiqa davomida 95 daraja issiqlik bilan ishlov berildi va undan shablon sifatida foydalanildi. ;

2. PCR reaktsiyalarini tayyorlang: manfiy nazorat (1 mkL namunani bir xil miqdorda Mycoplasma Free Water bilan almashtiring) va musbat nazorat (1 mkl namunaga Shablon sifatida 0,5 mL musbat nazorat qo'shing) har bir tajriba. Tajriba davomida bir marta ishlatiladigan niqob va qo'lqop kiying va ekzogen mikoplazmaning noto'g'ri kiritilishining oldini olish uchun ehtiyotkorlik bilan ishlang;

3. PCR dasturini sozlash:

4. Jel elektroforezi: 10 mL PCR mahsulotini oling va elektroforezni aniqlash uchun 1% agaroz jelidan foydalaning.

5. Natijalarni tahlil qiling: Har bir tajribada namunalarning Mycoplasma bilan ifloslanishini salbiy nazorat va ijobiy nazorat natijalari bilan solishtiring. Ijobiy tarmoqli hajmi taxminan 500 bp edi. Agar salbiy nazorat sinovi natijalarida chiziqlar bo'lsa, bu PCR tizimida ifloslanish bo'lishi mumkin va natijalarni yana tasdiqlash tavsiya etiladi. Agar kerak bo'lsa, o'ziga xos mikoplazma turlarini aniqlash uchun PCR mahsulotlarini muntazam ravishda tartiblash mumkin.

1. Ushbu to'plam M. orale, M. arginini, M. bovis, M. fermentlar, M. galliseptikum, M. hominis, M. pirum, Ureaplasma spp, M. hyorhinis, M. pnevmoniya, A. laidlawii va boshqa kamida 11 turdagi mikoplazma bilan ifloslanish.

2. Foydalanishdan oldin barcha reagentlar muzda eritilib, yaxshilab aralashtirilishi va ishlatilgandan keyin -20 darajada saqlanishi kerak.

3. Har bir tajriba uchun salbiy nazorat va musbat nazorat o‘rnatilishi kerak va eksperimental guruh namuna shablonining gradientlarini o‘rnatishni tavsiya qiladi.

4. Operatsiya davomida niqob kiyish kerak, ekzogen ifloslanishning kiritilishi eksperimental natijalarga ta'sir qilmasligi uchun PCR ish standartlariga qat'iy rioya qilish kerak.

5. Hujayra tajribalarining ishonchliligi va barqarorligini ta'minlash uchun mikoplazmaning ifloslanishini muntazam ravishda aniqlash tavsiya etiladi.

6. Xavfsizligingiz va sog'ligingiz uchun laboratoriya xalati va bir martalik qo'lqop kiying.

Faqat tadqiqot uchun foydalanish uchun!

Issiq teglar: Mikoplazmani aniqlash to'plami（pcr）, Xitoy mikoplazmani aniqlash to'plami（pcr） ishlab chiqaruvchilar, etkazib beruvchilar, zavod